'biochimie et biotechnologies' (thème du congrès de Marrakech 2004) couvre les résultats de plusieurs travaux de recheche portant, entre autres, sur: la purification et transformations des protéines.

Etude cinétique de la réaction d'acétylation des protéines de pois dans un réacteur agité

N. NASRALLAH, l. BOUCHENAFA & A. BENSMAILI

USTHB, Faculté de génie mécanique et génie des procédés, Laboratoire de génie de la réaction chimique, BP 32 EL alia Bab Ezzouar Alger, Algerie. E-mail: nas_nour@yahoo.fr

L'objectif de ce travail consiste d'abord à étudier l'hydrodynamique dans un réacteur agité avant d'effectuer la cinétique de la réaction d'acétylation des protéines de pois. L'étude de l'hydrodynamique dans un réacteur agité en configuration ouvert et fermé en utilisant la distribution des temps de séjours (DTS) a été effectuée pour caractériser l'écoulement à l'intérieur du réacteur. La technique la plus couramment utilisée est une méthode conductimétrique (méthode des traceurs) ; utilisant généralement la soude comme traceur et l'eau déminéralisé comme fluide de travail.
Sur la base du temps de mélange, les résultats obtenus montrent que la qualité de mélangeage est meilleure lorsque le réacteur est muni de deux turbines montée sur un même arbre assurant ainsi une bonne turbulence du fluide, ainsi que le système ouvert présente les plus faibles valeurs de volume mort dans la plus part des cas étudiés, cette caractéristique du mélange est déjà intéressantes pour d'éventuelles applications industrielles. De plus, les industriels s'intéressent beaucoup plus aux appareils qui fonctionnent en continu, car il bénéficient les avantages de régime permanent et d'une assistance moindre. Après la caractérisation du réacteur agité, nous avons étudié la réaction d'acétylation sur l'isolat de pois. L'acétylation intéressent les groupements aminés des protéines. Au cours de la réaction, il se produit une hydrolyse spontanée de l'anhydride en acide carboxylique correspondant d'où une chute de pH compris entre 7 et 9. La modification des protéines par acétylation permet d'augmenter les propriété fonctionnelles tel que leur solubilité en milieu aqueux et l'augmentation de leur propriété tensioactif et en étudié en particulier la sélectivité de la réaction qui est en compétition avec la réaction de l'hydrolyse de l'acide acétique.
Nous avons suivi d'une manière satisfaisante la cinétique de la réaction d'acétylation des protéines de pois dans un réacteur agité fermé par la méthode conductimétrique au moyen d'une sonde Tacussel. Une étude cinétique de la réaction qui permettra de déterminer d'une part, les conditions opératoires optimales susceptibles de conduire à des taux de conversion intéressants, et d'autre part les paramètres cinétiques de la réaction tels que ; la constante de la vitesse, ainsi que l'énergie d'activation correspondante.

Mots-clés: réacteur agité; acétylation, protéines, acétylation des protéines, pois, isolat de pois, hydrodynamique d'un réacteur

Purification et caractérisation d'une bactériocine anti-Listeria produite par Enterococcus faecium F420 isolé à partir de lait cru de chèvre

F. ACHEMCHEM1,2, J. ABRINI1 , M. MARTINEZ-BUENO2, E. VALDIVIA2 & M. MAQUEDA2
1Département de Biologie, Groupe de Biologie Cellulaire et Moléculaire, Faculté des Sciences, Université Abdelmalek Essaâdi, Tétouan, Maroc, 2 Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Granada, Espagne

Les bactéries lactiques sont connues par leur capacité d'inhiber dans les aliments le développement de bactéries pathogènes et de détérioration. Cette capacité d'antagonisme est attribuée à la production de métabolites antimicrobiens tels que les bactériocines. Ces derniers sont des composés protéiques secrétés dans le milieu extracellulaire et qui présentent un mode d'action bactéricide. Enterococcus faecium F420 a été isolé à partir de lait cru de chèvre. La recherche de l'antagonisme bactérien dans le milieu solide a été réalisé suivant la méthode de double couches dans des conditions qui éliminent l'effet de l'acide lactique et du peroxyde d'hydrogène. L'activité antagoniste de la souche E. faecium F420 est dirigé essentiellement contre Listeria monocytogenes et des souches du genre Enterococcus. Les substances inhibitrices produites par la souche F420 sont détruites par la trypsine et la protéase, ce qui indique que les agents actifs sont de nature protéique. Ces substances retiennent leur activité antimicrobienne après traitement à 100ºC pendant 5 min, 80ºC pendant 10 min et 60ºC pendant 30 min et elles sont stables à pH acide et basique. La production de la bactériocine, dénommée entérocine F420, commence dès le début de la phase logarithmique de croissance de la bactérie productrice. La purification de l'entérocine F420 a été réalisée en trois étapes successives : chromatographie sur gel d'amberlite XAD-16, suivie de chromatographie sur gel C-18 et finalement par chromatographie liquide haute performance en phase inverse (RP-HPLC). La purification par RP-HPLC a révélé l'existence d'un seul pic doté d'activité antibactérienne. La masse moléculaire de la bactériocine purifiée a été estimée par spectrométrie de masse (MALDI-TOF-MS; Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of Flight Mass Spectrometry) à 4628,45 Da. Le séquençage partiel du peptide F420 a montré une grande homologie à l'entérocine P. La souche bactériocinogène E. faecium F420 et sa bactériocine montrent des potentialités très intéressantes pour leur application dans la lutte contre Listeria monocytogenes dans des systèmes alimentaires. Cette application concerne les produits laitiers en général et notamment le jben de chèvre élaboré de façon artisanale et dans des conditions hygiéniques no contrôlées.

Mots clés : Lait de chèvre, bactériocines, bactéries lactiques, Enterococcus faecium, Listeria monocytogenes