Les marqueurs moléculaires de type 'RFLP' reposent sur la digestion d'un ADN (DNA) cible par une ou plusieurs enzymes de restriction spécifiques des sites de restriction portés par l'ADN.
Après électrophorèse, les fragments séparés sont hybridés avec un ADN sonde, provenant souvent de banques de DNA génomique ou complémentaire. Cette sonde peut provenir d'une espèce proche de l'espèce à étudier (sonde hétérologue).
Si deux individus diffèrent par un ou plusieurs sites ou, même, par la distance séparant deux sites identiques consécutifs, il se crée une différence dans la longueur des fragments générés par l'enzyme de restriction. Les milliers de fragments obtenus après digestion enzymatique et révélés par le bromure d'éthidium (BET), montrent sous UV un seul voil continu (smear).
Une fois transféré sur une membrane de nylon ou de nitrocellulose (Southern, 1975) et hybridé par un DNA sonde, l'ADN cible digéré est visualisé par autoradiographie, si la sonde est marquée au P32 (sonde chaude) ou par méthodes biochimiques si la sonde est non radioactive (sonde froide).
Les causes du polymorphisme sont :
-
perte ou gain d'un site de restriction
- mutation de type insertion-déletion
Dans les deux cas les loci sont généralement bialléliques et l'expression des allèles est codominante.
Les
marqueurs de type RFLP sont codominants.
Liens utiles:
Isoenzymes-mutations
: http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-mutations.pdf
Isozymes. Principe de détection : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-detection.pdf
Isozymes : loci, allèles : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-loci-alleles.pdf
RAPD : http://www.takween.com/techniques/11_RAPD.pdf
AFLP : http://www.takween.com/techniques/13_AFLP.pdf
SSR (microsatellites) : http://www.takween.com/techniques/microsatellites-SSR-marqueurs.pdf
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marqueurs moléculaires PCR