THEME 2: BIOTECHNOLOGIES ET SANTE

An easy and a practical process of extraction of simmondsin and oil in one step from jojoba seeds

A. BELLIROU 1, A. BOUALI 1, B. BOUAMMALI 2, N. BOUKHATEM 1 & A. BERRICI 3

1 Laboratoire de génétique et de biotechnologies végétales, Faculté des sciences, Université Mohamed I, Oujda, Maroc.
2 Laboratoire de photochimie et chimie macroMoléculaire, Faculté des sciences, Université Mohamed I, Oujda, Maroc.
3 Laboratoire d'Aridoculture et d'Ecologie Végétale, Faculté des sciences, Université Mohamed I, Oujda, Maroc.

The jojoba plant, simmondsia chenensis (link) Schneider, is a semi-arid evergreen shrub. It grew wild in the desert south-western United States and North-western Mexico. Now it is cultivated in other countries, such as, Argentina, Peru and Morocco.
Approximately all simmondsin and oil can be easily removed in one step by repeated extraction with water at 90°C from ground jojoba seeds. The optimum time and temperature of extraction were respectively 1.5h and 90°C. Quantitative analysis of simmondsin was made by HLPC.

EVALUATION IN VITRO DES POTENTIALITÉS ANTIBACTÉRIENNES ET ANTIFONGIQUES DES ALGUES MARINES (RHODOPHYCEAE) DES CÔTES MAROCAINES

R. BOUHLAL & H. RIADI

Département de géologie, UFR : Sciences de la mer, Faculté des Sciences,
Université Abdelmalek Essaâdi.

Ce travail consiste à mettre en évidence l'action des extraits algaux d'algues rouges (des côtes marocaines) sur des cultures bactériennes et fongiques par des méthodes pharmaceutiques.
La méthode de diffusion consiste à mettre des disques (papier Whatman) stériles imbibés par les extraits algaux dans les boites de pétri qui sont déjà ensemencés par les souches à testées.
la méthode de dilution : les dilutions sont préparées dans des tubes stériles contenant le milieu de culture stérile, ensuite ces tubes sont inoculés par la souche bactérienne, et après on ajoute une quantité précise d'extraits algaux.
Pour les deux méthodes, on fait une incubation pendant 24h à 37C° pour les bactéries et à 24C° pour la levure.
Dans la première méthode, l'activité antimicrobienne se révèle par l'apparition des zones d'inhibition autour des disques. Les résultats de l'inhibition sont exprimés en mm en mesurant le diamètre d'inhibition qui se présente comme une auréole claire qui entoure le disque.
Dans la deuxième méthode, les résultats sont réalisés par la mesure de la densité optique à l'aide d'un spectrophotomètre à une longueur d'onde de 570 nm.
Seize espèces d'algues rouges ont été collectées dans quatre localités différentes du Détroit et de la Méditerranée occidentale marocaine. Des extraits methanoliques ont été obtenus et testés sur deux souches bactériennes (Gram + et Gram-) et sur la levure.
L'évaluation de la bioactivité par la méthode de diffusion sur disques de Ceramium rubrum, Callithamnion granulatum, Centroceras clavulatum, Polysiphonia atlantica, Pterosiphonia fruticulosa,Halopitys incurvus, Gelidium pusillum, Pterocladia capillacea, Gracilaria conferta, Gracilaria multipartita, Plocamium coccineum, Hypnea musciformis, Gigartina pistillata, Gigartina teedi, Sphaerococcus coronopifolius et Asparagopsis armta a révélée que 11 espèces sont actives au moins pour l'un des microorganismes. La plus forte inhibition, à la fois antibactérienne et antifongique, est celle de Sphaerococcus coronopifolius.
L'étude de l'effet de la variation du volume d'extrait sur les bactéries en milieu liquide montre que la majorité des espèces testées ont un effet inhibiteur sur la cinétique de croissance bactérienne à partir de 200 µl.
Ce travail préliminaire possède comme originalité la valorisation de la richesse algale de la région Nord, la recherche d'alternatives aux antibiotiques commerciaux d'origines animales et chimiques.

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The Insulin Gene and TNF Region in Type 1 Diabetes: Evidence for Linkage and Association in Moroccan Subjects

L. BOUQBIS 1, O. AKHAYAT 1, H. GARCHON 2, F. CALAFELL 3 & H. IZAABEL 1

(1): Laboratory of Cellular and Molecular Biology, University Ibnou-Zohr, Agadir, Morocco.
(2): Institut National de Santé et de Recherche Medicale (INSERM) U25, Hôpital Necker-Enfants malades, Paris, France.
(3): Facultat de Ciències de la Salut i de la Vida, Universitat Pompeu Fabra, Barcelona, Catalonia, Spain
E-mail : BOUQBISL@yahoo.fr

One of the strongest contributors to genetic susceptibility to type 1 diabetes (T1DM), after the major histocompatibility complex, is the IDDM2 region. It was mapped to the insulin (INS) locus, located on chromosome 11p15.5. We have investigated 123 sporadic T1DM patients and 119 healthy control subjects from the Souss region of Morocco as well as 12 families with multiple patients. Patient and control individuals were typed for the -23 HphI, +805 DraIII, and +1121 PstI SNPs, and a random subsample was also typed for the -356 VNTR polymorphism. Except for the -23 HphI and +805 DraIII pair, all other polymorphisms were not in linkage disequilibrium, contrary to what was found in other Caucasoid populations. Association of size class I VNTR alleles with T1DM was confirmed. HLA-DR-specific association of INS region polymorphisms with T1DM suggests an interaction between HLA class II and the INS (IDDM2) region in the architecture of genetic susceptibility to T1DM.

The contribution of single nucleotide polymorphisms in tumour necrosis factors and to autoimmune diseases, and to type 1 diabetes mellitus (T1DM) in particular, is not well established, and may be confounded by linkage disequilibrium to class II HLA genes. At least two polymorphisms seem to have functional relevance in the respective genes: TNFA-307 and TNFB+252. We have typed these two polymporphisms in samples of Moroccan T1DM patients and controls for which class II HLA genes had already been typed. TNF and compound TNF-class II HLA haplotypes were inferred; it is the first time that such a design is implemented. Independently of linkage disequilibrium with class II HLA, TNF haplotype TNFA-307*2 - TNFB+252*2 showed a significant protective effect (OR=0.031). Such effect could be detected because Morocco shows the highest frequency of the TNFA-307*2 allele reported so far. This highlights the possible population differences in alleles contributing to autoimmune diseases.

développement d'un système de " Clean-up " à double phase pour la détermination fluorométrique des aflatoxines dans des échantillons alimentaires

I. BOURAIS 1, A. AMINE 1, M. VENANZI 2, L. MICHELI 2, D. MOSCONE 2 & G. PALLESCHI 2

1Faculté des Sciences et Techniques de Mohammedia, Laboratoire des Analyses chimiques et des Biocapteurs. Maroc
2Dipartimento di Scienze e Tecnologie Chimiche, Università di Roma "Tor Vergata". Italie

Les mycotoxines, substances produites par les moisissures se développant sur différents produits alimentaires (céréales, fruits, lait), présentent des activités mutagènes et cancérogènes. Parmi ces mycotoxines on retrouve les aflatoxines produites par différentes espèces d'Aspergillus lors de conditions de stockage défectueuses mais aussi durant la croissance des végétaux.
Du fait du danger que présente ce type de toxines pour la santé de l'Homme, plusieurs travaux de recherches ont été réalisés pour le contrôle des aliments à risque de contamination par les aflatoxines même à très faible concentration.
Dans le même sens, notre groupe de recherche a développé une nouvelle méthode de " clean-up " des aflatoxines après leur extraction à partir des échantillons alimentaires. Cette nouvelle technique repose sur la séparation des aflatoxines par un système à double phase (phase aqueuse et phase organique).
Les aflatoxines sont extraites des aliments par une phase organique, qui, mise en contact avec une phase aqueuse, permettra la diffusion des toxines dans cette dernière phase. La concentration en aflatoxines est finalement déterminée par fluorométrie à 350nm ( exc).
La technique " clean_up " développé pour l'analyse des aflatoxines dans des échantillons alimentaires, s'est avérée simple avec un temps d'analyse qui est relativement court mais surtout sensible avec une limite de détection égale à 0.3 g/Kg (AFB1). Cette technique peut être également couplé à d'autres techniques d'analyse notamment les techniques chromatographiques pour une détermination individuelle de chaque type d'aflatoxine.

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Etude de la Distribution de Six Microsatellites dans la Population Marocaine : Application en Phylogénétique et en Médecine Légale.

S. CHADLI 1, A. LOUBBARDI 2, S. EL KHOULTI 2 & H. IZAABEL 1

1Laboratoire de Biologie Cellulaire et Moléculaire, Faculté des Sciences, Université Ibn Zohr BP 8106 Cité Dakhla, Agadir Maroc.
2Laboratoire National de la Police Scientifique, 6 rue Ibnou Bouraid, Quartier des Palmiers, Casablanca Maroc.
E-mail : schadli@caramail.com

Les Microsatellites ou les STRs (Short Tandem Repeated DNA) sont très abondants dans le génome humain. Ils sont caractérisés par un niveau de mutation extrêmement élevé et un fort polymorphisme intra et inter - populationnel. Ces caractéristiques font des microsatellites des marqueurs idéals pour révéler le degré de divergences ou d'affinités génétiques, établir les relations phylogénétiques entre les différentes populations et définir une position anthropologique à la population marocaine dans son contexte Méditerranéen. Ces STRs sont également utilisés dans les identifications ou les analyses en médecine légale. Dans ce travail, nous avons analysé ces loci STRs (HUMTHO1, HUMFESFPS, HUMF13A1, HUMVWA, HUMTPOX, HUMCSF1PO) afin de contribuer à l'établissement d'une base de données sur la population du Maroc et explorer l'apport de ces loci dans les études phylogénétiques.
Aucune déviation statistiquement, significative de l'équilibre de Hardy Weinberg n'est observée. Les distances génétiques sont calculées entre les différentes populations du pourtour Méditerranéen sur la base des fréquences alléliques. Les résultats de l'analyse, à travers les arbres phylogénétiques et les analyses en composantes principales utilisées, montrent une divergence génétique claire entre les populations marocaines et celles Européennes.
Une contribution génétique sub-saharienne relativement basse dans la population marocaine est mise en évidence. Ceci pourrait être expliqué par les relations de migration d'individus entre les populations Nord Africaines et Sub-sahariennes, dont l'histoire garde des traces. Les méthodes statistiques utilisées, montrent que les populations marocaines Arabes et Berbères se regroupent et partagent un fond génétique Paléo Nord Africain commun.

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Activités antimicrobiennes des algues marines (Chlorophyceae et Phaeophyceae)

I. CHIHEB & H. RIADI

Université abdelmaalek esaadi, Faculté des sciences, Tétouan

Notre travail est inscrit dans le cadre de la biotechnologie des algues marines visant la caractérisation antibactériennes et antifongiques des extraits de certaines espèces d'algues marines, ceci va nous permettre d'une part de valoriser la richesse de la côte méditerranéenne et de rechercher des substituants aux antibiotiques commerciaux d'origine animal et chimique et d'autre part de créer à l'échelle régionale d'une unité pilote dans ce domaine.

Dix neuf espèces d'algues (6 des Chlorophycées et 13 des Phéophycées) ont été collectées dans le Détroit de Gibraltar (Ksar sghir) et la Méditerranée Occidentale (Smir, Martil et Amsa) du Maroc pour l'évaluation de leur activité antibactérienne et antifongique.
Les extraits acètoniques de ces 19 espèces sont testés sur des bactéries Gram négatives (Escherichia coli), Gram positives (Listeria innocua) et une levure (Saccharomyces cerevisae) en utilisant deux méthodes, la méthode de diffusion en disques et la méthode de dilution.

Par la méthode de diffusion en disques, les disques de papiers de filtre stériles, imbibées auparavant par l'extrait algal sont déposées à la surface d'un milieu de culture ont étaient entourées après l'incubation par des halos clairs de diamètres variés selon les germes et les espèces à tester.
- Six espèces des Chlorophycées (Enteromorpha intestinalis, Enteromorpha ramulosa, Ulva lactuca, Codium tomentosum, Codium adhaerens et Cladophora prolifera) sont actives contre Escherichia coli, une seule espèce (Ulva lactuca) contre Listeria innocua et deux espèces (Enteromorpha intestinalis et Enteromorpha ramulosa) contre Saccharomyces cerevisae.
-Treize espèces de Phéophycées (Cladostephus spongiosus, Halopteris scoparia, Dictyota linearis, Dictyopteris membranacea, Padina pavonia, Colpomenia sinuosa, Phyllaria brevipes, Saccorhiza polyschides, Fucus platycarpus, Sargassum vulgare, Cystoseira tamariscifolia, Cystoseira mediterranea et Cystoseira usneoides) sont actives contre Escherichia coli, 7 espéces (Cladostephus spongiosus, Dictyota linearis, Dictyopteris membranacea, Padina pavonia, Fucus platycarpus , Cystoseira mediterranea et Cystoseira usneoides) contre Listeria innocua et 6 espèces (Cladostephus spongiosus, Dictyota linearis, Dictyopteris membranacea, Padina pavonia, Fucus platycarpus, et Cystoseira usneoides) contre Saccharomyces cerevisae.

Par la méthode de dilution, l'inoculum des souches à tester est distribué dans une série de tubes stériles qui contient le milieu de culture et l'extrait algal à différents volumes.
La mesure de la densité optique permet de suivre la croissance des germes à étudier en présence des volumes progressifs de l'extrait algal.
Pour chaque espèce d'algue testée, la densité optique diminué progressivement que leur extrait augment, et par conséquent la diminution de la croissance des germes à étudier.

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Utilisation de Donax trunculus comme sentinelle pour l'évaluation de l'état de santé des plages sableuses de la baie d'Agadir

F. EL HAMIDI, A. BANAOUI, M. AZDI, A. KAAYA. & A. MOUKRIM 1

1Laboratoire Eaux et Environnement, Departément de Biologie, Faculté des Sciences, Université Ibn Zohr, B. P. 28/S, Dakhla 2060 Agadir, Maroc. Tél. : +212.48.220957 Fax +212.48.220100 E-mail : fatelhamidi@yahoo.fr

Ce travail a porté sur l'étude de Donax trunculus comme espèce sentinelle pour l'évaluation de l'état de santé des plages sableuses de la baie d'Agadir.
Cette étude présente l'effet, sur certains paramètres biochimiques (l'Acétylcholinéstérase, les Glutathion S-Transférases, la Catalase et la peroxydation lipidique), de l'exposition de Donax trunculus à des eaux et à des sédiments prélevés de certains sites de la baie d'Agadir (Cap Ghir, Anza, Port, Plage municipale d'Agadir et Oued Souss). Des dosages chimiques des hydrocarbures aromatiques polycycliques, dans les sédiments échantillonnées le long de la baie à différentes profondeurs ont été réalisés. Ces sédiments et les eaux prélevées de différents sites ont servi par la suite à l'exposition de l'espèce. Les résultats de l'analyse chimique des HAP dans les sédiments a classé les deux sites du port et d'Anza comme pollués par les HAP comparativement aux autres sites. Ceci est également confirmé par les analyses biochimiques faites sur les échantillons exposés au sédiment. Mais, cette contamination reste faible en se basant sur les normes de la classification internationale. Cette différenciation des deux sites d'Anza et du port est retrouvée également à travers les expériences de contamination de Donax trunculus par de l'eau et du sédiment récoltés de sites répartis le long de la baie.
Ces résultats nous ont permis de montrer l'intérêt de l'utilisation d'une approche multimarqueur chez Donax trunculus, et de proposer cette espèce comme sentinelle pour la surveillance de la contamination des côtes et particulièrement des plages sableuses.

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Purification et Caractérisation biochimique de l'enzyme Glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogènase (GAPDH) de la levure Yarrowia lipolytica

L. FOURRAT 1, A. IDDAR 1, C. GANCEDO2 & A. SOUKRI 1

1- Unité de génie enzymatique et Biologie Moléculaire, Laboratoire de Biochimie, Faculté des Sciences Aïn-Chock, Université Hassan-II, Casablanca, Maroc.
2- Unité de Biochimie et génétique des levures, Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto SOLS, , madrid, Spain.

Yarrowia lipolytica est une levure non conventionnelle de grand intérêt à la fois fondamental et biotechnologique. Malgré cet intérêt, il manque encore une connaissance approfondie de la régulation d'une voie principale comme la glycolyse ; à peine on sait que l'activité de l'Hexokinase est assez faible et fortement inhibée par le Trehalose-6-phosphate ou que la Pyruvate Kinase présente des caractéristiques cinétiques différentes de celles de Saccharomyces cerevisiae.
Dans ce contexte, nous avons initié une étude de la Glycéraldéhyde-3- Phosphate Déshydrogénase de Y. lipolytica (GAPDH, EC 1.2.1.12), enzyme clé de la glycolyse qui catalyse la phosphorylation oxydative du Glycéraldéhyde-3-Phosphate en 1,3-diphosphoglycérate. Nous avons purifié cette enzyme d'après un protocole qui comprend une précipitation au sulfate d'ammonium et une chromatographie sur colonne de Bleu Cibacron. Nous avons obtenu une purification de 120 fois avec un rendement de 17%. D'après les études de spécificité au cofacteur, l'enzyme est NAD-dépendante, elle a un pH optimale de l'ordre de 7 et présente la particularité de rester stable jusqu'à une température de 70ºC après incubation de 10 min. L'enzyme a un poids Moléculaire natif de 132 kDa approximativement, et celui de sous-unités est de 34 kDa ; ainsi, la GAPDH est vraisemblablement homotétramérique.
Ce travail sera continué par l'étude approfondie des caractéristiques de cette enzyme et l'étude des effets de l'interruption du gène codant cette GAPDH sur le métabolisme de Yarrowia lipolytica.

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Apport de la biologie Moléculaire dans la détection du Virus du Papillome Humain " HPV" associé au cancer du col de l'utérus

M.MEFTAH EL KHAIR, R. AIT MHAND & MM. ENNAJI

Laboratoire de virologie UER " Microbiologie & Hygiène et Virologie ", UFR " Environnement & Santé ", Faculté des Sciences et Techniques -Mohammedia. Université Hassan II - Mohammedia, BP 146, quartier Yasmina (20650) FST Mohammedia

Le cancer du col utérin est un véritable problème de santé publique, étant donné qu'il constitue la deuxième cause de mortalité à l'échelle mondiale en particulier dans les pays en voie de développement. L'infection par des papillomavirus humains (HPV) de types oncogènes est une cause nécessaire pour la genèse du cancer du col utérin.
L'amplification par la Réaction de Polymérisation en Chaîne (PCR) est parmi les méthodes les plus sensibles pour la détection des HPV oncogéniques, en particulier le HPV type16 (70- 80% carcinomes épidermoïdes) et le HPV type 18 (Plus de 50% des adénocarcinomes) qui sont les plus incriminés dans la genèse des cancers de la sphère ano-génitale, notamment le cancer du col utérin.
Dans notre étude, nous avons voulu établir une détection Moléculaire du HPV, en vue d'une contribution à l'amélioration d'un diagnostic rapide et d' un dépistage précoce des lésions précancéreuses du col utérin. Pour ce, 20 biopsies à date ont été récupérées et analysées pour l'absence ou la présence de l'HPV.
Les résultats obtenus ont montré après extraction du matériel génétique, par la méthode classique phénol-chloroforme et amplification génique par PCR à l'aide des amorces universelles MY09 /MY11, la présence de ce virus dans la moitié des échantillons analysés.
L'infection cervicale à HPV est fréquente au Maroc, par ailleurs, le transfert de cette technologie aux laboratoires d'analyses médicales et d'anatomopathologie, va contribuer à la détection précoce des HPV associés au cancer du col utérin chez des patientes " dites à
risques ", susceptibles de développer une lésion cancéreuse.

Ce projet est soutenu financièrement par les projets PARS et PROTARS (CNRST-Rabat)

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Surveillance de L'équilibre glycémique et du risque cardiovasculaire chez des enfants diabétiques suivis à l'Institut Pasteur du Maroc

H. MOHAMMADI 1 ; F.QARBAL 1; A. BELHOUARI 3 ; L. HILAL2; A. BELLIK 1 ; A. EL MALKI 1; N. DERSI 1 ; M. HASSAR1 ; N. GHALIM 1.

1 - Laboratoire de Biochimie, Institut Pasteur du Maroc- Casablanca
2 - Laboratoire de génétique et Biologie Moléculaire, Faculté des Sciences Kenitra
3 - Laboratoire de Biologie, Faculté des sciences Ben M'sik Casablanca

Le diabète de type 1 est une maladie auto-immune définie par un désordre du métabolisme glucidique et lipidique. Notre étude a été effectuée sur 100 enfants diabétiques âgés de 3 à 18 ans recrutés au niveau de l'association ONA des jeunes diabétiques de Casablanca, Le suivi de ces enfants a été réalisé sur une période de 4 ans.
Nous avons apprécié le contrôle de l'équilibre glycémique par la détermination de l'hémoglobine glycosylée (HbA1c) qui représente un paramètre essentiel dans la surveillance des diabétiques et le dosage du cholestérol total, des triglycérides, du cho-HDL, du cho-LDL, pour apprécier le risque cardio-vasculaire chez ces enfants diabétiques.
La technique utilisée pour le dosage de l'HbA1c est la chromatographie échangeuse de cations, les paramètres lipidiques ont été évalués par méthode colorimétrique.
Nos travaux ont montré que ces enfants peuvent être répartis en quatre stades selon le pourcentage de l'HbA1c. Nous avons obtenus une population légèrement hétérogène dont 50 % font partie du stade IV (HbA1c moyenne = 11 %), 40 % du stade III (HbA1c moyenne = 9 %), 8 % du stade II (HbA1c moyenne = 7 %) et 2 % du stade I (HbA1c moyenne = 5 %).
La population étudiée présente également une augmentation du cholestérol total (3.7 %), des Triglycérides (14 %), du cho-LDL(10 %) et une diminution du cho- HDL ( 7.8 % ) par rapport à une population témoin.
Nos résultats montrent un déséquilibre Lipidique des enfants diabétiques en faveur d'une prédisposition à un risque cardio-vasculaire, ces résultats doivent êtres complétés par des tests génétiques.

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Impact du Ciprofibrate sur le métabolisme cellulaire : Effets sur la ß-hydroxybutyrate déshydrogénase (Enzyme des corps cétoniques)

D. MOUNTASSIF1, M. KABINE1, N. LATRUFFE2 ET M. S. KEBBAJ 1

1 Laboratoire de Biochimie, Faculté des Sciences, Université Hassan II-Aïn Chock, km 8 route d'El Jadida BP. 5366,
Casablanca, Morocco.
2 LBMC, Faculté des Sciences, 6 Bd Gabriel, Université de Bourgogne, 21000 Dijon cedex, France.

Les mitochondries représentent la centrale énergétique de la cellule et le siège de la production des corps cétoniques (principalement le ß-hydroxybutyrate et l'acétoacétate) qui jouent un rôle important dans le métabolisme énergétique et la biosynthèse cellulaire. Ces corps cétoniques sont les produits finaux de la dégradation des acides gras et leur production est régulée par la ß-hydroxybutyrate déshydrogénase (BDH) (EC 1.1.1.30) : oxydo-réductase à NAD (H), située au niveau de la membrane interne mitochondriale.
Dans ce travail, nous avons étudié l'effet d'un hypolipémiant : le ciprofibrate (principe actif du médicament "Lipanor" utilisé dans les cas des dyslipidémies) sur les enzymes du métabolisme cellulaire, surtout sur l'activité de la BDH et par la suite la détermination du site de son action et ceci à la fois au niveau des mitochondries lourdes (de grande taille) et légères (de petite taille) du foie de la gerboise (Jaculus orientalis) - rongeur vivant dans l'étage semi-aride du Maroc oriental - qui présente la capacité - après ingestion du médicament - de ne pas développer une hépatomégalie (augmentation de la taille du foie par prolifération peroxysomale donnant par la suite une tumeur) contrairement au rat et l'homme.
Les résultats ont montré in vivo, un effet très significaif du ciprofibrate sur les biomarqueurs subcellulaires et du stress oxydatif. In vitro, un effet inhibiteur de la BDH des deux populations mitochondriales a été observé et cette inhibition se produit au niveau du site actif de la BDH provoquant ainsi un dérèglement dans le métabolisme des corps cétoniques qui représentent les principaux combustibles utilisés par le cerveau.

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Etude des propriétés ionophoriques de l'atropine: Complexation et transport à travers un modèle membranaire des ions Na+, K+ , Ca2+ et Mg2+

L. RABI, A. MOUTAOUAKIL & BLAGHEN

Unité de Bio-industrie et Toxicologie Moléculaire, Laboratoire de Microbiologie, Biotechnologie et Environnement, Université Hassan II, Faculté des sciences Aïn chock, Km 8 route d'El Jadida BP 5366 Maârif, Casablanca

Nous reportons l'activité de l'atropine (un alcaloïde monocyclique fortement toxique, et qui cause des morts une fois ingéré en même quantité modérée) sur la complexation et le transport à travers un modèle membranaire des ions Na+ et K+, Ca2+ et Mg2+. L'atropine composé monocyclique s'est révélé capable d'extraire et de transférer des ions Na+ et K+, Ca2+ et Mg2+ d'une phase aqueuse vers une autre organique ; ainsi, l'étude cinétique du transport à travers le modèle membranaire varie d'un ion à un autre et que le flux de transport de ces ions dépend de la concentration de l'atropine.

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Production d'un nouveau réactif monoclonal anti-B

F. SADIQ 1,2, A. TISSENT 1,2, N. HABTI 1, D. RADALLAH 2, N. BENCHEMSI 1.

1- Laboratoire de Génie génétique et Cellulaire. Service d'Hématologie. Faculté de Médecine et de Pharmacie. Casablanca. MAROC. Fouad-sadiq@hotmail.com
2- Laboratoire de Biologie et Physiologie Cellulaire. Faculté des Sciences Ben M'sik. Casablanca. MAROC

Les anticorps monoclonaux sont des outils performants dans la recherche surtout en immunologie Moléculaire et cellulaire. Ils ont remplacé les anticorps polyclonaux dans l'identification des groupes sanguins et la détection des marqueurs cellulaires et des agents pathogènes.
Le but de ce travail est de produire un anticorps monoclonal identifiant les groupes sanguins ABO. La technique des hybridomes a été appliquée.
Une souris femelle Balb/c a été immunisée intrapéritonéalement avec des hématies humains de groupe B. Les splénocytes ont été fusionnés avec les cellules myélomateuses P3X63Ag8 selon le protocole modifié de Galfré et al. L'identification des anticorps monoclonaux a été réalisée par hémagglutination avec des hématies B traitées par la broméline. Un anticorps monoclonal anti-B (A22.10) a été sélectionné et évalué pour son utilisation dans la fabrication d'un réactif anti-B. L'anticorps A22.10 agglutine exclusivement les hématies B et AB. Il ne reconnaît pas les hématies A et O.
L'anticorps monoclonal A22.10 peut être utilisé dans le groupage sanguin en identifiant le système ABH. Il présente un intérêt dans des études de la cartographie épitopique des antigènes B. Il peut aussi être utile en étudiant leur expression en cancer.

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Activité antimoisissures et antimycotoxines de l'algue brune marine Cystoseira tamariscifolia

Z. SOUHAILI 1.,M. FAID 2, M. LAGZOULI 1

1. Service de chimie-biochimie faculté de médecine et de pharmacie, Casablanca, e- mail: z.souhaili@caramail.com
2. Département de microbiologie et biotechnologie alimentaire, IAV Hassan II, Rabat

Cystoseira tamariscifolia est une algue brune marine endémique du Maroc, elle est très répandue sur la cotes atlantique marocaine, pourtant cette algue n'a suscité que peu l'intérêt des chercheurs par rapport à d'autres algues brunes de son genre, c'est dans cet objectif que notre étude a été effectuée dans un but de valorisation de l'algue Cystoseira tamariscifolia par la recherche de nouvelles substances naturelles biologiquement actives pour une éventuelle utilisation dans le domaine pharmacologique et/ou biotechnologique.
Dans ce travail, nous avons étudié l'activité antimoisissures et antimycotoxines de l'algue brune marine Cystoseira tamariscifolia.
L'algue a été extraite par le méthanol, l'éthanol, l'hexane et l'eau. Les quatre extraits ont été testés contre certaines espèces de moisissures à savoir : Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Aspergillus sp et Penicillium sp sur milieux de culture solides et milieux liquides. L'extrait éthanolique a été aussi testé contre la production d'aflatoxines par l'espèce fongique Aspergillus flavus.
Nous avons trouvé que seul l'extrait éthanolique possède un net effet antifongique sur les espèces de moisissures étudiées à des concentrations qui varient de 7.5 à 10% et qu'à partir de 1% cet extrait présente un effet inhibiteur sur la production d'aflatoxines B2 par l'espèce Aspergillus flavus.

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Production d'un anticorps monoclonal humain anti-AB

A. TISSENT1,2, F. SADIQ 1,2, N. HABTI 1, N. EL AMRANI 2, N. BENCHEMSI 1.

1- Laboratoire de génie génétique et cellulaire, Faculté de Médecine et de Pharmacie de Casablanca
2- Laboratoire de Biologie et Physiologie Cellulaires, Faculté des Sciences II Ben M'sik Casablanca. E-mail : atissent@hotmail.com

La production des anticorps monoclonaux a un impact important en immunohématologie. La majeure partie des anticorps monoclonaux sont d'origine murine. Ils sont obtenus par la technique des hybridomes. Cependant cette technique ne permet pas l'obtention des anticorps monoclonaux anti-Rh. L'alternative est la technique de la transformation des lymphocytes humains par le virus d'Epstein Barr (EBV).
Le but de ce travail est de produire des anticorps monoclonaux humains de groupages sanguins anti-Rh et anti-ABO.
Les prélèvements sanguins sont obtenus à partir de femmes immunisées. Les lymphocytes sont ensuite séparés des autres éléments figurés du sang sur un gradient de densité, et transformés par l'EBV. La transformation des lymphocytes est observée entre la 4ème et la 6ème semaine.
Seize transformations ont été réalisées. Seul un clone nommé 7JP3 sécrétant un anticorps anti-AB nommé 7JP à été obtenu et stabilisé par fusion avec des cellules myélomateuses murines P3X63Ag8 selon la technique des hybridomes puis clonés par dilution limite. L'anticorps humain sécrété reste stable plus de 6 mois. Il reconnaît spécifiquement tous les groupes A1, A2, B, A1B, et A2B. En outre il présente une réactivité intéressante vis à vis des groupes faibles, notamment le groupe Ax. La comparaison de la réactivité de cet anticorps à d'autres anticorps monoclonaux anti-AB vis à vis de 20.000 donneurs de sang et de plus de 3.000 malades présentant différentes pathologies n'a montré aucune discordance.
L'anticorps 7JP peut être utilisé comme un réactif pour la détermination des groupes sanguins ABO et l'étude des épitopes de l'antigène AB.

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Association des gènes TNF avec la maladie de Behçet dans la population marocaine

M.WAJIH1, L.BOUQBIS1, S.CHADLI1, F.CHOUKRI2, O.AKHAYAT1 et H.IZAABEL1

1 Laboratoire de Biologie Cellulaire et Moléculaire, Faculté des Sciences, Université Ibn Zohr Agadir
2 Faculté des Sciences Ben M'sik, Casablanca.

La maladie de Behçet est une affection inflammatoire caractérisée par une aphtose bucco-génitale associée de façon variable à des manifestations systémiques, le plus souvent oculaires, cutanées ou articulaires. La pathogénie de la maladie est méconnue, cependant les données épidémiologiques et cliniques sont en faveur d'une intervention des facteurs environnementaux et génétiques. Dans le but de déterminer les gènes de susceptibilités aux maladies autoimmunes telles que la Behçet, les études s'intéressent à l'analyse de l'association marqueurs-maladies. Le complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) ou région HLA, est le plus polymorphe des systèmes génétiques humains. Cette région se trouve fréquemment associée aux maladies autoimmunes du faite de l'importance que jouent certains de ses gènes dans la réponse immunitaire.
Les gènes du Facteur de Nécrose Tumorale (TNF et TNF ), qui codent pour des cytokines, impliquées dans les phénomènes inflammatoires et situés dans la région HLA classe III, sont parmi les gènes candidats intervenants dans la pathogénicité des maladies autoimmune en générale et la maladie de <behçet en particulier.
Notre travail a porté sur l'étude d'association de ces gènes avec la maladie de Behçet dans la population marocaine. Nous avons analysé deux marqueurs bialléliques (ou SNPs) par la la technique PCR-RFLP:
" Un polymorphisme biallélique localisé -308 pb dans la région promotrice du gène TNF .
" Un polymorphisme biallélique situé à +252 pb dans le premier intron du gène TNF .
Notre étude cas-témoins a porté sur 89 patients et 91 individus sains. Les résultats nous ont permis de révéler une association de ces marqueurs avec la maladie de behçet dans notre échantillon. Les deux loci sont en déséquilibre de liaison et l'haplotype TNF *2 -TNF *2 ainsi que le génotype TNF *2/2, sont significativement associés à une protection.

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Etude de la cytotoxicité des huiles essentielles de Rosmarinus officinalis et de Mentha pulegium

K. MOUNCHID1, F. SADIQ2, A. TISSENT2, N. HABTI2, T. ABOUSSAOUIRA 1, A. RACHIDAI 3, M. ALAOUIl-ISMAILI 4, A. TANTAOUI-ELARAKI 5.

1. Laboratoire d'Histologie-Embryologie. Faculté de Médecine et de Pharmacie. Casablanca.
2. Laboratoire de Génie génétique et Culture cellulaire. Faculté de Médecine et de Pharmacie. Casablanca.
3. Laboratoire d'Agrophysiologie et Culture In Vitro. Faculté des Sciences. Kenitra.
4. Laboratoire de Biochimie. Institut Agronomique et Vétérinaire. Rabat.
5. Laboratoire de Microbiologie. Institut Sup-Agro. Casablanca.

Le but de ce travail est d'étudier l'effet cytotoxique des huiles essentielles de Rosmarinus officinalis et de Mentha pulegium sur les cellules de myélomes P3X63Ag8. Les huiles essentielles ont été extraites par hydrodistillation à partir de plantes récoltées au sud du Maroc. L'analyse de la composition chimique de ces huiles essentielles a été effectuée par CPG et la cytotoxicité a été déterminée par le test de viabilité cellulaire. Les altérations cellulaires ont été recherchées au niveau des cellules après coloration par May-Grunwald-Giemsa. Nos résultats ont montré que les constituants majoritaires de l'huile essentielle de Rosmarinus officinalis sont le 1,8-cinéole (42%), le ?-pinène (11,92%) et le camphre (13,99%). Le constituant majoritaire de l'huile essentielle de Mentha pulegium est la R-(+)-pulégone (82%). Le test de viabilité cellulaire a montré un effet cytotoxique des huiles essentielles de Rosmarinus officinalis et de Mentha pulegium sur les cellules tumorales. L'étude de la morphologie des cellules tumorales traitées a révélé une lyse cellulaire avec éclatement membranaire, une hypertrophie cellulaire et une condensation de la chromatine.
Cette étude démontre une cytotoxicité des huiles essentielles de Rosmarinus officinalis et de Mentha pulegium sur des cellules tumorales (myélome P3X63Ag8) en agissant sur leurs membranes. D'autres études sont nécessaires pour rechercher l'effet des ces huiles essentielles sur le cycle cellulaire.

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Prostratine, molécule candidate contre VIH

A. ECH-CHAHAD1, G. APPENDINO2, L. BOUYAZZA1

1. UFR Pharmacologie, Pharmacochimie et Biochimie, FST Settat Maroc.
2. Facoltà di farmacia DESCAF Italia.
E-mail: Echchahad@hotmail.com

Le prostratine est un dérivé du 12-deoxyphorbol-13-acétate qui présente une activité antivirale intrinsèque contre HIV. Le prostratine induit une expression de la forme provirale latente qui le rend un composé unique et de grande importance dans le domaine biomédical. Le prostratine est contenu en état de trace dans la mamala (Omalanthus nutans) qui est une plante endémique qui appartient à la famille de l'Euphorbiaceaes. Le but de ce travail est de produire le prostratine par semi-synthèse à partir du 12-deoxyphorbol extraite du latex d'Euphorbia resinifera récoltée au Maroc.

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développement des biocapteurs basés sur la microbalance à quartz modifiée par le transfert des films de Langmuir-Blodgett de l'immunoglobuline G/amphiphile

A. JBARI(1), L. BELLARBI(1), A. ERRACHID(2), N. ZINE(2) , M. LOTFI(1), R. ZINE(3)
(1) Laboratoire LGE, ENSET-Rabat, BP. 6207 Rabat-Instituts Maroc
(2) Research Center in Bioelectronics and Nanobioscience-University of Barcelona, Spain
(3) Faculté des Sciences-Université Md. V Rabat

Le temps et les dépenses que les compagnies pharmaceutiques doivent investir, pour introduire de nouveaux agents thérapeutiques dans le marché, sont considérablement élevés. Les autorités en charge de la santé publique en sont parfaitement conscientes. Nous rappelons qu'en 1996, par exemple, le budget global pour la recherche et le développement de nouveaux médicaments était déjà de l'ordre de 30 milliards de dollars ! On estime aussi, que la période que nécessite la découverte d'un nouveau traitement prend en moyenne jusqu'à 4 ans et peut avoir, comme conséquence, l'examen de milliers de molécules pour l'étude de leur toxicité. Ce qui explique le coût et la limitation quantitative et qualitative en matière d'innovation d'une nouvelle thérapie.
Le développement des biocapteurs constitue l'un des défis les plus importants pour le vingt et unième siècle. Ce domaine intéresse aujourd'hui de nombreux chercheurs opérant dans l'environnement, le diagnostic clinique, l'industrie alimentaire etc.
L'objectif global de ce projet est d'explorer la possibilité de développer des biocapteurs basés sur la microbalance en cristal de quartz modifiée par transfert des films de
Langmuir-Blodgett de l'immunoglobuline G/amphiphile. Ces dispositifs (microbalance en cristal de quartz (MCQ)), adaptés aux milieux liquides, donneront un signal de réponse caractérisant les interactions entre la couche sensible déposée sur la microbalance et les substances biologiques à détecter.
Cette méthode de mesure directe est très intéressante si on la compare aux essais colorimétriques classiques, telles que l'analyse enzymatique, dans laquelle, plusieurs étapes très lentes, sont nécessaires pour obtenir un signal exploitable.
La méthodologie proposée est basée sur l'exploitation des mécanismes de l'interaction anticorps - antigènes , en utilisant une technique appropriée pour immobiliser les constituants biologiques actifs.
Comme nous allons montrer, l'utilisation de la MBQ offre une détection très sensible des constituants biologiques in situ, puisque la fréquence d'oscillation dépend de la masse du cristal, en diminuant proportionnellement à la masse. Par ailleurs, la réduction du temps d'analyse permettra d'effectuer des mesures plus directes et facilement exploitables.