La multiplication végétative du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) peut être assurée par les clones de palmier provenant de la culture des tissus (زراعة الأنسجة عند نخيل التمر). La culture in vitro peut être effectuée selon l'embryogenèse somatique. Au Maroc, les vitro-plants du palmier dattier plantés dans le champs produisent actuellement des fruits (dattes) qui sont évalués sur leur qualité par rapport au cultivar parent.
Les vitro-plants de palmier dattier provenant de la culture de tissus in vitro résultent de deux techniques : l'organogenèse et l'embryogenèse somatique. Cette dernière peut introduire des variations dans les obtentions, contrairement à l'organogenèse.
Le matériel végétal de base pour la culture des tissus du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) et la production de vitro-plants peut provenir de la base des jeunes feuilles du 'coeur' des rejets. Les rejets sont débarrassés des feuilles externes jusqu'à l'apparition de la partie blanche et tendre (coeur) du rejet. Ce matériel est désinfecté par immersion 20 minutes dans une solution de fongicide (4 grammes de mancozone par litre d'eau plus quelques gouttes de teepol).
Après rinçage à l'eau distillée, les coeurs de rejets sont incubés 20 min dans une solution d'hypochlorite de sodium 12° (Eau de Javel) contenant 300 mg de permanganate de potassium par litre de solution.
Avant la mise en culture, les explants sont rincés à l'eau distillée. Des explants de 0,5 cm sont mis en culture. Le milieu de culture pour la phase d'initiation peut contenir 100mg/l de 2,4 D (Acide 2,4-DichlorophénoxyAcétique) et 3,0 mg/l d'IPA (6-IsoPentenylAminopurine) dans un milieu de base de Murashige et Skoog (MS) auquel sont ajoutés le fer (Fe-EDTA = FeSO4, 7 H2O (27,8 mg/l) + Na2-EDTA, 2 H2O (37,30 mg/l)), la thiamine, HCl (0,4 mg/l), le myo-inositol (100mg/l), l'adénine (40 mg/l), le phosphate de sodium, 2 H2O (170 mg/l), le saccharose (30 g/l), et le charbon actif (3 g/l). Pour gélifier le milieu, l'agar est ajouté à 0,7%. Le pH est ajusté à 5,7 avant autoclavage.
La phase d'initiation dure 4-8 mois à l'obscurité à 27°C. Les tubes sont ensuite transférés en lumière diffuse (photopériode 16/8, 100 à 3000 lux). Des repiquages successifs espacés de 40 jours sont effectués. La phase de différenciation est obtenue après transfert des cals sur milieu MS complet dépourvu d'hormones (+/- 1,5 g/l de charbon actif) : des nodules embryonnaires apparaissent à la surface des cals à partir de 2 mois et demi de culture.
La phase de régénération et germination des embryons somatiques a lieu sur milieu MS sans hormones avec un éclairage de 1000 lux. Le maintien des embryons en germination sur le même milieu avec un éclairage plus intense (1700 lux) permet d'obtenir des plantes. L'addition d'ANA (Acide Naphtalène Acétique) à 0,1 mg/l stimule l'élongation et l'enracinement.
Référence : AISSAM, F. 1993. embryogenèse somatique et régénération du palmier dattier... Diplôme d'Études Supérieures, Université Cadi Ayyad, Marrakech (Maroc).
Une étude biochimique concernant les protéines, les peroxydases et les polyphénoloxydases des différents cals a été réalisée afin de détecter de façon précoce les cals embryogènes des cals non embryogènes. Trois types de cals peuvent apparaître : le cal rouge hyperhydrique (cal succulent), le cal blanc racinaire et le cal friable. Ce dernier cal est embryogène (BAAZIZ, AISSAM, BRAKEZ, BENDIAB, EL HADRAMI & CHEIKH. 1994. Euphytica 76, 159-168).
Electrophoregramme des protéines extraites des cals provenant des variétés de palmier dattier Bou-Feggous (BFG) et Bou-Sthammi Noire (BSTN) – permet d'identifier les lignées embryogènes.
La culture in vitro des différents cultivars du palmier dattier s'impose de plus en plus pour la conservation des ressources génétiques et la lutte contre la maladie du Bayoud qui détruit les meilleurs cultivars au Maghreb. Cinq clones de palmier dattier correspondant à 3 cultivars réputés au Maroc (BFG, JHL and BSK) et 2 clones sélectionnés à partir de palmiers issus de graines (khalts) (S16 and S35) ont résulté de la culture in vitro.
Après acclimatation et plantation à Errachidia (sud du Maroc) en 1989, une évaluation sur 10 ans a montré que la formation d'inflorescences est plus fréquente chez les clones S16 et S35. Des variabilités isoenzymatiques élevées ont été trouvées pour les peroxydases (POX), polyphénoloxydases (PPO), GOT, estérases et endopeptidases, confirmant l'intérêt des marqueurs biochimiques.
La formation d'inflorescences est plus fréquente chez les clones S16 et S35 par rapport aux clones JHL et BSK. Le clone BFG montre une situation intermédiaire.
Des variabilités isoenzymatiques élevées ont été trouvées pour les enzymes des classes des oxydo-réductases
(peroxydases
(POX) and polyphénoloxydases (PPO)),des transférases (glutamate oxaloacetate transaminase (GOT)) et des hydrolases (esterases (EST) et endopeptidases (ENP)). L'analyse AFC a montré une corrélation négative entre les deux principaux traits morphologiques (formations de rejets et d'inflorescences). Les clones de palmier dattier caractérisés, respectivement par une abondance des inflorescences et de rejets forment deux groupes différents avec des isoenzymes caractéristiques.
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