Vitro-plants du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) obtenus par culture des tissus in vitro زراعة الأنسجة عند نخيل التمر
La
multiplication végétative du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) peut être assurée par les clones de palmier provenant de la culture des tissus (زراعة الأنسجة
عند نخيل التمر). La culture in vitro peut être effectuée selon l'embryogenèse somatique. Au Maroc, les vitro-plants du palmier dattier plantés dans le champs produisent actuellement des fruits (dattes) qui sont évalués sur leur qualité par rapport au cultivar parent.
Les vitro-plants de palmier dattier provenant de la culture de tissus in
vitro, résultent de deux techniques; l'organogenèse (organogenesis) et l'embryogenèse somatique (somatic embryogenesis). Cette dernière peut introduire des variations dans les obtentions de cette culture, contrairement à l'organogenèse.
Multiplicationin vitro du palmier dattier par embryogenèse somatique
Le
matériel végétal de base pour la culture des tissus du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) et la production de vitro-plants peut provenir de la base des jeunes feuilles
du 'coeur' des rejets. Les rejets sont débarrassés des feuilles externes jusqu'à l'apparition de la partie blanche et tendre (coeur) du rejet. Ce matériel est désinfecté par immersion 20 minutes dans une solution de fongicide (4 grammes de mancozone par litre d'eau plus quelques gouttes de teepol). Après rinçage à l'eau distillée, les coeurs de rejets sont incubés 20 min. dans une solution d'hypochlorite de sodium 12° (Eau de Javel) contenant 300 mg de permanganate de potassium par litre de solution.
Avant
la mise en culture, les explants sont rincés à l'eau distillée. Des explants de 0,5 cm sont mis en culture.
Le milieu de culture pour la phase d'initiation peut contenir 100mg/l de 2,4 D (Acide 2,4-DichlorophénoxyAcétique) et 3,0 mg/l d'IPA (6-IsoPentenylAminopurine) dans un milieu de base de Murashige et Skoog (MS) auquel sont ajoutés le fer (Fe-EDTA = FeSO4, 7 H2O (27,8 mg/l) + Na2-EDTA, 2 H2O (37,30 mg/l)), la thiamine, HCl (0,4 mg/l), le myo-inositol (100mg/l), l'adénine (40 mg/l), le phosphate de sodium, 2 H2O (170 mg/l), le saccharose (30 g/l), (et le charbon actif (3 g/l)). Pour gélifier le milieu, l'agar est ajouté à 0,7%.
Le pH est ajusté à 5,7 avant autoclavage du milieu de culture. Ce milieu de culture est enfin distribué sur des tubes à essai qui une fois autoclavés serviront de support pour les vitro-plants.
La phase d'initiation dure 4-8 mois se déroule à l'obscurité à 27°C. Les tubes sont ensuite transférés en lumière diffuse. La photopériode est de 16/8 (100 à 3000 lux).
Des repiquages successifs espacés de 40 jours sont effectués.
La phase de différenciation est obtenue après transfert des cals sur milieu de culture MS complet dépourvu d'hormones (+/- 1,5 g/l de charbon actif) et maintien des cultures en lumière diffuse. Des nodules embryonnaires apparaissent à la surface des cals. Ces derniers apparaissent à partir de 2 mois et demi de culture.
La phase de régénération et germination des embryons somatiques prend lieu sur milieu MS sans hormones avec un éclairage de 1000 lux. Le maintien des embryons en germination sur le même milieu de culture et avec un éclairage plus intense (1700 lux) permet d'obtenir des plantes.
L'addition au milieu de culture d'ANA (Acide Naphtalène Acétique)à raison de 0,1 mg/l stimule l'élongation et l'enracinement. Référence:AISSAM, F. 1993. embryogenèse somatique et régénération du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.). Contribution à l'étude de la régulation physiologique de la nutrition azotée durant la phain vitro. Diplôme d'Etudes Supérieures,Université Cadi Ayyad, Marrakech (Maroc).
Recherche de marqueurs biochimiques de l'embryogenèse somatique chez le palmier dattier
Une étude biochimique concernant les protéines,
les peroxydases
et les polyphénoloxydases des
différents cals a été réalisée
afin de détecter de façon précoce les cals
embryogènes des cals non embryogènes. Trois types de cals peuvent apparaître dont le cal rouge
hyperhydrique (cal succulent), le cal blanc racinaire et le
cal friable. Ce dernier cal est embryogène (BAAZIZ, AISSAM, BRAKEZ, BENDIAB, EL HADRAMI & CHEIKH. 1994. Euphytica 76, 159-168). voir figure ci dessous (électrophoregramme des protéines)
La phase de différenciation est obtenue après transfert des cals sur milieu de culture MS complet dépourvu d'hormones (+/- 1,5 g/l de charbon actif) et maintien des cultures en lumière diffuse. Des nodules embryonnaires apparaissent à la surface des cals. Ces derniers apparaissent à partir de 2 mois et demi de culture.
La phase de régénération et germination des embryons somatiques prend lieu sur milieu MS sans hormones avec un éclairage de 1000 lux. Le maintien des embryons en germination sur le même milieu de culture et avec un éclairage plus intense (1700 lux)
permet d'obtenir des plantes. L'addition
au milieu de culture d'ANA (Acide Naphtalène Acétique)
à raison de 0,1 mg/l stimule l'élongation et l'enracinement.
Electrophoregramme
des protéines extraites des cals provenant des variétés
de palmier dattier Bou-Feggous (BFG) et Bou-Sthammi Noire (BSTN).
Vitro-plants
de palmier dattier au Maroc. Quelles caractéristiques morphologiques
et biochimiques ?
La
culture in vitro des differents cultivars
du palmier dattier s'impose de plus en plus pour la conservation
des ressources génétiques et la lutte contre les maladies
comme la maladie du bayoud qui détruit
les meilleurs cultivars du dattier au
Maghreb.
Cinq clones de palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) correspondant
à 3 cultivars réputés au Maroc (BFG, JHL and BSK)
et 2 clones sélectionnés à partir de palmiers issus
de graines (khalts) (S16 and S35) ont résulté de la culture
in vitro du palmier dattier au Maroc.
Les clones acclimatés ont été plantés à Errachidia (sud du Maroc) en 1989. après 10 années de culture, les clones ont été évalués sur le critère d'absence/présence de 2 principaux traits morphologiques liés, respectivement, à la formation de rejets et d'inflorescences. Des extraits enzymatiques bruts préparés à partir des folioles des différents clones, ont fait l'objet d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide afin d'étudier leur polymorphisme enzymatique.
La formation d'inflorescences est plus fréquente chez les clones S16 et S35 par rapport aux clones JHL et BSK. Le clone BFG montre une situation intermédiaire.
Des variabilités isoenzymatiques élevées ont été trouvées pour les enzymes des classes des oxydo-réductases
(peroxydases
(POX) and polyphénoloxydases (PPO)),des transférases (glutamate
oxaloacetate transaminase (GOT)) et des hydrolases (esterases (EST)
and endopeptidases (ENP)). L'analyse AFC a montré une corrélation
négative entre les deux principaux traits morphologiques (formations
de rejets et d'inflorescences). Les clones de palmier dattier caractérisés,
respectivement par une abondance des inflorescences et de rejets forment
deux groupes différents avec des isoenzymes caractéristiques.
Article 1.
M.
Azeqour, K. Majourhat, M. Baaziz. 2002. Morphological variations and
isoenzyme polymorphism of date palm clones from in vitro culture
acclimatized and established on soil in South Morocco.
Euphytica 123, 57-66. Abstract: Five clones of date palm (Phoenix dactylifera L.) corresponding
to three reputed Moroccan cultivars (BFG, JHL and BSK) and two selected
seedling genotypes (S16 and S35), derived from in vitro culture, were
acclimatized and planted in Errachidia soil (South Morocco) in 1989.
After 10 years of culture, clones were evaluated on the presence/absence
of the two principal morphological characters (offshoots, inflorescences).
Then, their leaf extracts were subjected to electrophoresis on polyacrylamide
gels in order to determine their isoenzyme polymorphism. Inflorescence
formation is relatively more frequent in the clones S16 and S35 than
in clones JHL and BSK. Clone BFG showed an intermediate situation. High
isoenzyme variations were found for the oxidoreductases (peroxidases
(POX) and polyphenoloxidases (PPO)), the transferase (glutamate oxaloacetate
transaminase (GOT)) and the hydrolases (esterases (EST) and endopeptidases
(ENP)) enzymes. The factorial component analysis exhibited a negative
correlation between the two principal morphological characters (presence
of inflorescences and offshoots formation). Date palm clones typified
respectively by high inflorescences and high offshoots formed two separated
groups showing each one some isoenzyme characteristics. All morphological
and enzyme variations were discussed in respect to the genotype effect
on the micropropagation process.
Article 2.
Mohamed
Azeqour, Mohamed Amssa , Mohamed Baaziz. 2002. Identification de la variabilité intraclonale des vitroplants de palmier dattier issus de culture in vitro par organogenèse : étude morphologique.
Comptes Rendus Biologies 325, 947-956 Résumé: Devant
le rythme accru de la dégradation de la palmeraie marocaine,
son repeuplement dépend de la plantation de vitroplants. Pour
évaluer le comportement de ces derniers, une étude morphologique
de clones de palmier dattier, obtenus par organogenèse à
partir de jeunes feuilles de ceurs de rejets, a été
réalisée sur 92 vitroplants issus de trois cultivars
(Boufeggous, Jihel et Bouskri) et de deux saïrs (Saïr 16bis
et 35). Les résultats de l'analyse en composante principale
(ACP) de 34 variables morphologiques de l'appareil végétatif
et reproducteur et ceux de la classification hiérarchique nous
ont permis de mettre en évidence une hétérogénéité
intraclonale de ces vitroplants au sein de chaque cultivar et saïr.
Un certain nombre de caractères ont été retenus
comme étant les caractères les plus discriminants. Ces
caractères peuvent avoir une application dans l'étude
de la conformité génétique des vitroplants par
rapport aux pieds mères. Abstract:The
greater rhythm of the degradation of the Morocco palm plantation implies
a repopulation with vitroplants. To estimate the behaviour of those
vitroplants, a morphological study of clones of date palm, obtained
via organogenesis from primordial leaves surrounding the shoot tip
of young offshoots, was carried out on 92 vitroplants arising from
three cultivars (Boufeggous, Jihel and Bouskri) and two saïrs
(Saïr 16bis and 35). The results of the Principal Components
Analysis (PCA) of 34 morphological variables of vegetative and reproductive
apparatus and those of the hierarchical classification allowed us
to show an intraclonal heterogeneity of these vitroplants within each
cultivar and saïr. A certain number of characters was selected
as being the most discriminating. These characters can be useful in
the study of vitroplants genetic conformity with regard to the parents.
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Publications relatives à la multiplication in vitro du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.)
BAAZIZ,
M. 2011. Reconstitution des palmeraies. Rôle de la recherche scientifique.
- إعادة
إعمار واحات النخيل بالمغرب. دور البحث العلمي في مواكبة تنمية الواحات
Séminaire de sensibilisation et valorisation des écosystèmes oasiens
pour un développement durable, 27-28 Septembre 2011, Foum El Hisn, Tata, Maroc, Morocco. AZEQOUR, M., AMSSA, M. & BAAZIZ, M.2002. Identification de la variabilité intra-clonale des vitro-plants de palmier dattier issus de culture in vitro par organogenèse.
Etude morphologique. Comptes Rendus Biologie 325, 947-956. AZEQOUR, M., MAJOURHAT, K. & BAAZIZ, M. 2002. Morphological variations
and isoenzyme polymorphism of date palm clones from in vitro culture
acclimatized and established on soil in south Morocoo. Euphytica 123,
57-66. BAAZIZ, M., MAJOURHAT, K. & BENDIAB, K. 2000. Date palm culture in
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L'embryogenèse somatique chez Phoenix dactylifera L. : Importance
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M., AISSAM, F., BRAKEZ, Z., BENDIAB, K., EL HADRAMI, I.& CHEIKH,
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de Doctorat en Biologie. Université Cadi Ayyad, Marrakech (Morocco). BENDIAB, K. 1998.Contribution à l'étude de la variabilité deshydrolases et des transférases chez le palmier dattier (Phoenix dactylifera L.). Apport à
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Cadi Ayyad, Marakech (Morocco). AISSAM, F. 1993. embryogenèse somatique et régénération
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l'étude de la régulation physiologique de la nutrition
azotée durant la phain vitro. diplôme d'Etudes Supérieures,Université
Cadi Ayyad, Marrakech (Maroc). BRAKEZ, Z. 1993. Oxydation des phénols chez le
palmier dattier. Les peroxydases et les polyphénoloxydases
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sa résistance à la maladie du Bayoud. diplôme d'Etudes Supérieures, Université Cadi Ayyad, Marrakech
(Morocco). BENDIAB, K. 1992. Contribution à l'étude de la variabilité
enzymatique et protéique chez le palmier dattier (Phoenix
dactylifera L.). Apport dans l'amélioration génétique
de la plante. diplôme d'Etudes Supérieurs, Université
Cadi Ayyad, Marrakech (Morocco).
LIENS UTILES:
Somatic embryogenesis and artificial seeds التطوير الجنيني الجسدي و البذور الاصطناعية
