Vocabulaire - مفردات - Vocabulary
| French | Arabic | English |
| Cultures in vitro | زراعات زجاجية | in vitro cultures |
| Culture de protoplastes | زراعة البروتوبلاست | Protoplast culture |
| Organogenèse | تطوير عضوي | Organogenesis |
| Embryogenèse somatique | تطوير جنيني جسدي | Embryogenesis |
| Explant avec bourgeon | مزدرع ب برعم | Explant with bud |
1- PREPARATION DU MILIEU DE CULTURE DE MURASHIGE ET SKOOG
Pour connaitre la composition du mileu de culture in vitro des plantes, il faut se référer à la page composition et préparation du milieu MS et à la vidéo qu'elle intègre
2- OBJECTIF DU TP. EFFET DE COMPOSITIONS HORMONALES (AUXINE/CYTOKININE) SUR LE DEVELOPPEMENT TISSULAIRE
2- Stérilisation à sec de la verrerie et de l'outillage nécessaire à la culture in vitro
La stérilisation de la verrerie et des outils nécessaires pour la culture in vitro peut se faire à sec à l'aide d'une étuve, un autoclave ou de l'éthanol.
3- Calcul du volume du milieu de culture Murashige Skoog (MS) nécessaire pour les expériences A, B, C et D
Pour 1 groupe de TP constitués de 4 équipes, on aura besoin de:
- 4 bocaux contenant chacun 100 ml de milieu de culture avec la combinaison d'hormones 2-4-D (0.05 mg/l) et BAP (2 mg/L). Au total, il faut 400 mL de mileu de culture (= 4 x 100 mL) par groupe.
- 12 tubes contenant chacun 25 ml de milieu de culture avec la combinaison hormonale 2-4-D (0.1 mg/l) et BAP (0 mg/L). Au total, il faut 300 ml de mileu de culture (= 12 x 25 mL) par groupe.
TOTAL : 700 mL (= 400 mL+ 300 mL)
Dans un becher de 1 litre:
- Ajouter comme prévu avant, les volumes convenables des solutions mères des macroéléments , microélément, fer, vitamines et acides aminés et myoinositol, sucrose et agar.
- Ajuster le pH à 5,8.
4- Répartition du milieu de culture Murashige et Skoog (MS) sur les erlenmeyers des expériences A, B, C et D à combinaisons hormonales différentes:
- Répartir le milieu de culture MS pH 5,8 sur 4 erlenmeyers à raison de 400 mL, 100 mL, 100 mL et 100 mL correspondant aux expériences A, B, C et D, respectivement.
- Stériliser sous vapeur et pression les 4 erlenmeyers pendant 20 minutes à l'aide d'un autoclave ou à défaut une cocotte minute (20 minute, après sifflement).
- Laisser refroidir quelques minutes.
- Ajouter les combinaisons hormonales auxines-cytokinines correspondantes aux espériences A, B, C et D (il faut bien calculer au préalable les volumes d'hormones à prélever à partir des solutions mères !). Agiter bien les solutions MS + Hormones. Agir rapidement (avant gélification de l'agar).
- Répartir le contenu de chaque erlenmeyer (A, B, C, D) sur les bocaux et les tubes destinés aux 4 expériences programmées pour 4 équipes de TP.
5- Mise en culture du matériel végétal
Deux techniques de culture in vitro seront utilisées dans ces TP: QUESTION 1. Pour préparer 100 mL d'ANA 0,1 M (poids moléculaire = 175 g), on aura besoin de x g d'ANA:(!x = 0,0175)(x = 1,75)(!x = 0,875)(!x = 0,175)(!x = 8,75)(!x = 17,5)(!x = 87,5)(!x = 165) QUESTION 2. Pour préparer 1 litre de milieu de culture contenant l'agar 0,8% (p/v), on aura besoin x g d'agarose:(x = 8 )(!x = 0,8)(!x = 4)(!x = 16) QUESTION 3. La concentration molaire (en mM) d'une solution de BAP à 1 g/l (PM de la BAP =225 g) est:(4,44)(!0,22)(!2,22)(!44,4) QUESTION 4. Pour préparer 1 litre d'un milieu de culture contenant 170 mg/L de phosphate de potassium, on utilise 20 mL d'une solution mère de macroéléments contenant du phosphate de potassium de concentration y g/L:(y = 8,5)(!y = 17)(!y = 85)(!y = 34) QUESTION 5. De ce fait, on aura dilué la solution mère z fois:(z = 50 )(!z = 17 )(!z = 20)(!z = 25)(!z = 40)(!z = 100) Pour s'entrainer sur les calculs des concentrations et des dilutions (préparation des solutions), visiter: LIENS UTILES -
Micropropagation et culture in vitro d'espèces végétales
الإكثار الدقيق و الزراعة الزجاجية للأصناف النباتية
- le Microbouturage : exemple de la Menthe poivrée, la Marjolaine ou du romarin…
- l’initiation d'organogenèse ou d'embryogenèse somatique en fonction de combinaisons hormonales chez le topinambour et la carotte…
La mise en culture des tissus végétaux choisis comporte les étapes suivantes :
1. Stérilisation du matériel végétal
- Préparation de la solution de stérilisation (alcool 70, eau de Javel…)
- Désinfection des explants (méthode, durée différentes selon le matériel végétal utilisé : voir les annexes).
2. Ensemencement
La mise en culture des explants végétaux sera réalisée sous la hotte à flux laminaire dans des conditions aseptiques. Les cultures seront ensuite incubées dans une enceinte de culture à 25°C pendant un mois.
3. Observation des résultats
- Observer les différentes cultures et noter les types de réponses et leur nombre.
- Comparer l’action des combinaisons d'hormones à concentrations différentes en auxines et cytokinines.
- Comparer la réponse des différents types d’explants.
Annexes:
Désinfection du matériel végétal et ensemencement
- Cas du micro-bouturage
- Prélever des boutures de 2 à 3 cm contenant des bourgeons à partir de la plante à étudier
- Enlever les feuilles
- Laver les boutures à l’eau distillée puis les passer dans l’alcool pendant 1 seconde
- Placer les boutures dans l’hypochlorite de sodium (Eau de Javel) à 50 % pendant 20 mn.
- Rincer les boutures 3 fois à l’eau distillée stérile sous la hotte à flux laminaire.
- Ensemencer des micro-boutures de 5 mm dans les tubes de culture à raison de deux bouture par bocal.
Cas de l’initiation de l'organogenèse direct et des cals. Exemple des racines de la carotte
- Essuyer la carotte avec un coton imbibé avec de l’alcool à 95°.
- Eplucher la carotte et la couper en morceaux de 2 à 3 cm de longueur.
- Immerger les fragments coupés dans l’eau de Javel à 50 % pendant 20 mn.
- Rincer trois fois à l’eau distillée stérile (sous la hotte à flux laminaire).
- Prélever un fragment à mettre en culture et le placer dans une boite de pétrie stérile, sous la hotte à flux laminaire.
- Enlever les parties externes attaquées par le désinfectant à l’aide d’un bistouri stérile.
- Découper des cubes de 5 mm3, environ contenant du cambium.
- Ensemencer les explants préparés dans des tubes contenant le milieu de culture avec les combinaison hormonales B, C et D (à raison de un explant/tube).
- Fermer les tubes avec du para-film.
- Marquer les tubes en précisant dans l'ordre le numéro de l'équipe, le numéro du groupe de Tp et la combinaison hormonale (B ou C ou D). Exemple l'étiquette 21C, fait référence à l'équipe 2 du groupe 1, combinaison hormonale C
Attention : toutes les manipulations devront être faites dans des conditions aseptique sous la hotte à flux laminaire.
Références bibliographiques:
-Murshige T. et Skoog F. (1962). A medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissue culture, Plantarum, 15: 473-497.
- Solutions chimiques. Calcul des concentrations et des dilutions (QCM)- اختبار في احتساب التركيزات والتخفيفات في المحاليل الكيميائية
- Concentrations de produits chimiques dans des solutions. Préparations et conversionsتركيزات المواد الكيميائية في المحاليل -
- Plant Protoplast culture
زراعة البروتوبلاست
- In vitro cultures by androgenesis and gynogenesis. Haplo-dipoidization techniques - الزراعات الزجاجية. النشوء الذكري
- In vitro cultures. Isolated cell culture -- الزراعات الزجاجية زراعة الخلايا المنعزلة
- Palmier dattier (Phoenix dactylifera L.). Micropropagation in vitro- الزراعة الزجاجية لنخيل التمر
- Vitro-plants. Modifications - تغيرات نواتج الزراعات الزجاجية
- Biotechnologies. QCM
البيوتكنولوجيات. اختبار للمعرفة
- congrès
SMBBM 2009
- Vitro-plants du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) obtenus par culture des tissus in vitro
زراعة الأنسجة عند نخيل التمر
- Embryogenèse
somatique che le palmier dattier
- Marquage en vitro-culture
Biotech-ecolo. net. Supports
CHAINE YOUTUBE (abonnement)
Plusieurs vidéos multilingues aux sujets des Biotechnologies et Biochimie
OUVRAGES
400 QCM et Concours (Ar, Fr) sur Structure et Métabolisme des Sucres, M. Baaziz, 2018:
- Présentation du livre
- Affiche du Livre
- Glossaire trilingues Français-Arabe-Anglais:
- ANNONCES
ENSEIGNEMENT DE MASTER
- Cours du Master Biotechnologies et Amélioration des Plantes,
Marrakech
- Travaux pratiques Master Biotechnologies et Amélioration des Plantes, Marrakech
- Master course 'Plant resistance against pathogens'
NEWSLETTER
Faculty of Sciences, Cadi Ayyad University
Marrakech, 40000, Morocco
Email: baaziz@uca.ac.ma
Phone: 212524434649 (post 513)
Fax: 212524434669
